Teknik Isolasi Mikroba

BAB I

PENDAHULUAN

I.1 Latar Belakang

          Dalam bidang ilmu mikrobiologi, untuk dapat menelaah bakteri khususnya dalam skala laboratorium, maka terlebih dahulu kita harus menumbuhkan mereka dalam suatu biakan yang mana di dalamnya hanya terdapat bakteri yang kita butuhkan tersebut tanpa adanya kontaminasi dari mikroba lain. Biakan yang semacam ini biasanya dikenal dengan istilah biakan murni, untuk melakukan hal ini, haruslah dimengerti jenis-jenis nutrien yang di isyaratkan oleh bakteri dan juga macam-macam lingkungan fisik yang menyediakan kondisi optimum bagi pertumbuhan bakteri tersebut.

          Teknik isolasi mikroorganisme adalah suatu usaha untuk menumbuhkan mikroba diluar dari lingkungan alamiahnya. Pemisahan mikroorganisme dari lingkungannya ini bertujuan untuk memperoleh biakan bakteri yang sudah tidak bercampur lagi dengan bakteri lainnya dan disebut biakan murni.

          Kegagalan dalam pemindakan mikroba dapat menyebabkan kontaminasi pada pertumbuhan mikroba, sehingga yang melatar belakangi pengadaan praktikum ini adalah untuk mengetahui teknik isolasi mikroorganisme agar tidak terjadi kontaminasi dalam pertumbuhan mikroba.

I.2 Tujuan

          Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui teknik-teknik isolasi mikroorganisme.

I.3  Waktu Dan Tempat

Praktikum dilaksanakan pada hari kamis tanggal 5 januari 2012, pukul 13.00-13.45 WITA,  di laboratorium biologi dasar FMIPA universitas hasanuddin makassar.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Populasi mikroorganisme yang ada di alam sekitar kita ini sangatlah besar dan cukup kompleks. Beratus spesies mikroba menguasai setiap bagian tubuh kita. Terdapat dalam jumlah yang cukup besar, sebagai contoh sekali kita bersin dapat menyebarkan beribu-ribu mikroorganisme (Pelczar, 1988).

Teknik isolasi mikroba adalah suatu usaha untuk menumbuhkan mikroba diluar dari lingkungan alamiahnya. Mikroorganisme dapat diperoleh dari lingkungan air, tanah, udara, substrat yang berupa bahan pangan, tanaman dan hewan. Jenis mikroorganismenya dapat berupa bakteri, khamir, jamur, kapang dll. Populasi mikroba di lingkungan sangan beranekaragam sehingga dalam mengisolasi diperlukan beberapa tahap penanaman sehingga berhasil diperoleh koloni tunggal. Koloni yang tunggal ini kemudian yang akan diperbanyak untuk suatu tujuan penelitian misalnya untuk mengisolasi DNA mikroba yang dapat mendeteksi mikroba yang telah resistem terhadap suatu antibiotik.atau untuk mengetahui mikroba yang dipakai untuk bioremediasi holokarbon (Ferdiaz, 1992).

Teknik Pemindahan Biakan

            Tujuan dari pemindahan biakan untuk menguasai teknik pemindahan biakan bakteri dari satu wadah ke wadah lain, secara aseptik sehingga hanya biakan murni yang diharapkan yang tumbuh. Hal ini sangat penting dalam tahap awal pekerjaan isolasi mikroba terutama yang berasal dari stok kultur ( bukan dari substrat). Kegagalan dalam hal pemindahan biakan dapatmenyebab kankontaminasi dari pertumbuhan mikroba yang tidak diharapkan (Dwyana dan As’adi, 2012).

            Pemindahan bakteri dari medium lama kemedium baru memerlukan banyak ketelitian. Terlebih dahulu kita harus mengusahakan agar semua alat-alat yang kan digunakan untuk mengerjakan medium dan pengerjaan inokulasi benar-benar steril. Hal ini untuk menghindari kontaminasi yaitu masuknya mikroba lain yang tidak diinginkan sehingga biakkan yang tumbuh di dalam medium adalah benar-benar biakan murni ( Dwidjoseputro, 1990).

Teknik Pertumbuhan Mikroorganisme

1.      Teknik Piringan Goresan (Streak plate method)

Medium agar dicairkan, didinginkan pada suhu 45 C, dituang ke dalam cawan petri steril (cawan gelas dengan garis tengag tiga inci) dan dibiarkan sampai menjadi padat. Kemudian dengan kawat gelang menginokulasi yang penuh dengan biakan campuran (misalnya specimen ludah atau bahan lain), goresan dilakukan diatas permukaan agar. Ada beberapa metode penggorean yang berbeda, namun kesemua metode bertujuan untuk meletakkan sebagian besar organism pada beberapa goresan pertama. Apabila sebaran dilakukan dengan menggerakkan kawat gelang kian kemari dari satu bagian ke bagian lain. Cawan petri, bakteri yang tertinggal pada kawat gelang semakin berkurang. Jika dilakukan secara sempurna, goresan akhir akan meninggalkan bakteri individual cukup terpisah satu sama lain, sehingga setelah mengalami pertumbuhan, koloni yang berasal dari bakteri individual akan benar-benar terpisah satu sama lain. Kemudian koloni tunggal dapat ditinggalkan kemedium steril, dan akan tumbuhlah biakan murni. (Dwiyana, 2011)

Ada beberapa teknik goresan yang biasa dipakai yaitu :

A.    Goresan Sinambung

Seperti gambar di bawah ini :

B. Goresan T

Seperti gambar di bawah ini :

C. Goresan Kuadran (Streak quadrant)

  Seperti gambar di bawah ini :

 

2.      Metode Tuang (pour-plate method)

            Terdiri atas penginokulasian biakan campuran kedalam tabung uji yang mengandung agar mencair yang telah didinginkan pada suhu 45⁰c. isinya diaduk untuk memencarkan bakteri keseluruh medium. Campuran itu kemudian ditungkan kedalam cawan petri steril dan dibiarkan padat pertumbuhan koloni terjadi baik dalam medium tujuan pada kedua proses ialah untuk memisahkan bakteri satu sama lain sehingga sel-sel itu akan tumbuh menjadi koloni-koloni yang terpisah didalam medium yang padat. Kemudian dapat diambil sel-sel dari satu koloni untuk mendapatkan biakan murni. Dalam praktek, sering piringan kedua digores kembali dengan organism yang berasal dari koloni yang diidolasi untuk menjamin bahwa hasil yang diperoleh adalah biakan murni (Dwiyana, 2011).

3.      Teknik Sebar (spread plate)

Teknik isolasi dan mikroba dengan cara menyebarkan mikroba pada permukaan media yang akan digunakan (Trianda, 2011).

4.      Teknik Pengenceran (dilution method)

Suatu sampel dari suatu suspensi yang berupa campuran bermacam- macam spesies diencerkan dalam suatu tabung yang tersendiri. Dari hasil pengenceran ini kemudian di ambil kira- kira 1 mL untuk diencerkan lebih lanjut. Jika dari pengenceran yang ketiga ini diambil 0,1 mL untuk disebarkan pada suatu medium padat, kemungkinan besar kita akan mendapatkan beberapa koloni yang akan tumbuh dalam mdium tersebut, akan tetapi mungkin juga kita hanya akan memperoleh satu koloni saja. Dalam hal yang demikian ini dapat kita jadikan piaraan murni. Jika kita belum yakin, Bahwa koloni tunggal yang kita peroleh tersebut merupakan koloni yang murni, maka kita dapat mengulang pengenceran dengan menggunakan koloni ini sebagai sampel (Trianda, 2011)

5. Teknik Micromanipulator

Mengambil satu bakteri dengan mikropipet yang ditempatkan dalam mikro manupulator, kemudian ditempatkan dalam mikromanupulator. Kemudian ditempatkan dalam medium encer untuk dibiakkan ( Trianda, 2011).

            Menurut Admin (2008), terdapat berbagai cara untuk mengisolasi mikroba yakni :

1)      Isolasi pada cawan

Prinsip pada metode isolasi pada cawan adalah mengencerkan mikroorganisme sehingga diperoleh individu spesies yang dapat dipisahkan dari organisme lainnya. Setiap koloni yang terpisah yang tampak pada cawan tersebut setelah inkubasi berasal dari satu sel tunggal. Terdapat beberapa cara dalam metode isolasi pada cawan, yaitu :  metode gaores kuadran dan metode agar cawan tuang. Metode gores kuadran , bila metode ini dilakukan dengan baik akan menghasilkan terisolasinya mikroorganisme, dimana setiap koloni berasal dari setiap sel. Metoe agar tuang berbeda dengan metoe gores kuadran, cawan tunag menggunakan medium agar yang dicairkan dan didinginkan yang kemudian dicawankan, pengenceran tetap perlu dilakukan sehingga pada cawan yang terakhir mengandung koloni-koloni yang terpisah di atas permukaan atau di dalam cawan.

2)      Isolasi pada medium cair

Metode isolasi pada medium cair dilakukan bila mikroorganisme tidak dapat tumbuh pada agar cawan (medium padat), tetapi hanya dapat tumbuh pada kultur cair. Metode ini juga perlu dilakukan pengencaran dengan beberapa serial pengenceran. Semakin tinggi pengenceran peluang untuk mendapatkan satu sel semakin besar .

3)      Isolasi sel tunggal

Metode isolasi sel tunggal dilakukan untuk mengisolasi sel mikroorganisme berukuran besar  yang tiak dapat diisolasi dengan metode agar cawan atau medium cair, sel mikroorganisme dilihat dengan menggunakan pembesaran sekitar 100 X, kemudian sel tersebut dipisahkan dengan menggunakan pipet kapiler yang sangat halus ataupun micromanipulator yang dilakukan secara aseptik.

                      

BAB III

METODE PRAKTIKUM

III.1 Alat

Alat yang digunakan pada praktikum ini adalah : Cawan petri, Bunsen, Swab, Enkas, Spoit, Batang L dan Inkubator.

III.2 Bahan

Bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah : Biakan bakteri, Medium NA, dan Alkohol 70%.

III.3 Cara Kerja

ü  Isolasi mikroba dialam sekitar

1.      Tangan dibersihakan dengan menggunakan alkohol 70%, kemudian dimasukkan kedalam enkas.

2.      Cawan petri yang berisi medium NA dilidah apikan agar mikroba yang menempel pada cawan petri mati.

3.      Kemudian dengan menggunakan swab sampel diambil dari belakang leher.

4.      Sampel yang telah diambil dioleskan kepermukaan cawan petri yang telah berisi medium NA.

5.      Setelah itu kembali dilidah apikan dan diberi label sesuai perlakuan kemudian dibungkus dengan posisi terbalik agar uap dalam cawan petri tidak menetes pada medium.

6.      Diinkubasi dalam incubator selama42-48 jam pada suhu 37C.

ü  Isolasi mikroorganisme dengan metode tuang

1.      Tangan dibersihkan dengan menggunakan alkohol 70%  sebelum mengerjakan percobaan dalam enkas.

2.      Cawan petri disterilkan dengan cara dilidah apikan mulut cawan petri

3.      Biakan bakteri diambil dengan menggunakan spoit sebanyak 1 ml kemudian disemprotkan kedalam cawan petri lalu mendium NA dituangkan  kedalamnya.

4.      Cawan petri ditutup dan dilidah apikan kembali lalu diberi label sesuai perlakuan.

5.      Cawan petri digoyangkan memutar dengan teknik 8 agar merata kemudian didiamkan sampai padat.

6.      Dibungkus lalu diinkubasi dalam incubator selama  24-48 jam dengan suhu 37C.

ü  Isolasi mikroorganisme dengan cara tabur

1.      Tangan terlebih dahulu debersihkan dengan menggunakan alkohol 70% sebelum melakukan percobaan dalam enkas.

2.      Medium NA dituang kedalam cawan petri tunggu beberapa saat lalu dengan menggunakan spoit biakan bakteri diambil sebanyak 1 ml dan disemprotkan kedalam cawan petri yang berisi medium NA lalu diratakan dengan menggunakan batang L.

3.      Cawan petri ditutup lalu dilidah apikan kembali.

4.      Cawan petri didiamkan sampai padat lalu dibungkus.

5.      Diinkubasi dalam incubator selama 24-48 jam dengan suhu 37C.

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

IV.1 Hasil Pengamatan

   Isolasi mikroba di sekitar kita                         

          (Dibelakang telinga)                                  Metode tabur

 

                Mikroba tumbuh berbentuk                       Mikroba tumbuh pada

                  koloni  goresan sinambug                  Mikroba tumbuh hanya pada 

                                                                                     permukaan medium    

                

     Metode  Tuang

                   Seluruh bagian medium 

IV.2 Pembahasan

Pengisolasian merupakan suatu cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni. Kultur murni ialah kultur yang sel-sel mikrobanya berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal. Manfaat dilakukannya kultur murni adalah untuk menelaah atau mengidentifikasi mikroba, termasuk penelaahan ciri-ciri kultural, morfologis, fisiologis, maupun serologis, yang memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu macam mikroorganisme saja.

Metode tuang adalah suatu teknik dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara mencampurkan media agar yang masih cair dengan stok kultur bakteri. Dimana kelebihan metode ini adalah mikroorganisme yang tumbuh dapat tersebar merata pada media agar, metode ini cocok untuk isolasi mikroba yang bersifat anaerob. Kekurangan metode ini adalah kurang cocok apabila digunakan untuk isolasi mikroba yang bersifat aerob.

Metode sebar adalah teknik dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara menuangkan stok kultur murni atau menghapuskannya di atas media agar yang telah memadat. Bedanya dengan metode tuang adalah pencampuran stok kultur bakteri dilakukan setelah media agar memadat, sedangkan metode tuang kultur dicampurkan ketika media masih cair (belum memadat).

Dari hasil pengamatan pada Isolasi mikroba disekitar kita, digunakan medium NA (Nutrient Agar) dengan mengisolasi mikroba yang berasal dari belakang telinga. Setelah melakukan pengerjaan dan diinkubasi diinkubator, diperoleh hasil bahwa ditemukannya bentuk zig-zag dalam cawan petri atau berbentuk goresan sinambung berwarna putih yang menandakan adanya mikroba, sedangkan nama dan jumlah bakteri tidak dapat kami ketahui karena tidak adanya pengamatan yang dilakukan. Pertumbuhan mikroba pada belakang telinga sangat mungkin terjadi. Paparan  keringat, debu, kotoran, dan polusi dapat menyebabkan pertumbuhan mikroba pada belakang telinga.   Belakang telinga pertumbuhan mikrobanya sedikit kemungkinan karena jarang kontak dengan lingkungan atau benda-benda yang merupakan sumber mikroba.

Pada percobaan isolasi dengan cara penuangan menggunakan medium NA (Nutrien Agar). Dimana terlebih dahulu biakan mikroba disemprotkan pada cawan petri kemudian diberi medium NA, setelah diinkubasi dalam inkubator dari hasil pengamatan dapat dilihat bahwa  terdapat mikroba  di seluruh bagian media (dasar dan permukaan) dan pertumbuhan mikroba tidak merata. Hal ini mungkin disebabkan karena pada saat mengisolasi medium tersebut tidak rata. Adanya mikroba yang tumbuh diseluruh permukaan medium disebabkan karena pemberian biakan bakteri terlebih dahulu kemudian pemberian NA.

Pada percobaan isolasi dengan cara tabur juga menggunakan medium NA,  dimana medium NA yang terlebih dahulu dimasukkan kedalam cawan petri dan didiamkan beberapa saat sampai memadat kemudian biakan bakteri dimasukkan lalu diratakan dengan menggunakan batang L. setelah diinkubasi dari hasil pengamatan diperoleh hasil bahwa terdapat cukup banyak mikroba yang tumbuh disekitar permukaan cawan petri secara merata. Hal tersebut terjadi karena sel yang terletak di atas atau dalam perbenihan padat tidak dapat bergerak, maka tiap sel yang ditaruh pada atau dalam perbenihan padat akan tumbuh dan membentuk koloni dipermukaan cawan petri saja.

BAB V

PENUTUP

V.1 Kesimpulan

Dari percobaan diatas dapat disimpulkan bahwa :

Dalam suatu substrat atau media dapat tumbuh dari satu jenis mikroorganisme,dengan demikian lalu dikembangkan suatu teknik pemisahan yang disebut teknik isolasi.

Ada beberapa macam teknik isolasi diantaranya yaitu

1.      Teknik menggores adalah apabila mikroorganisme berada dalam suatu suspense atau suatu padatan, lalu dengan jarum inokulasi diambil dan digoreskan pada medium tertentu maka cara ini disebut cara menggores.

2.      Teknik menuang yaitu apabila mikroorganisme yang akan dipisahkan berada dalam satu suspensi, untuk memisahkan dituangkan kedalam medium tertentu maka disebut teknik menuang.

3.      Metode sebar adalah teknik dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara menuangkan stok kultur murni atau menghapuskannya di atas media agar yang telah memadat.

V.2 Saran

Sebaiknya sebelum  melakukan percobaan, praktikan diberi waktu untuk membaca buku penuntun praktikum agar dalam proses praktikum sudah ada bayangan mengenai percobaan yang akan dilakukan.

DAFTAR PUSTAKA

Dwyana Z,. Nurhaedar. 2011. Mikroobiologi Dasar. Universitas Hasanuddin. Makassar

Dwyana Z,. Abdullah. 2012. Penuntun Praktikum Mikrobiologi. Universitas Hasanuddin. Makassar

Firebiology. 2009. Teknik Isolasi Mikroorganisme.  www.Firebiology.wordpress.com.  Diakses pada tanggal 15 Januari 2012. Campalagian  

Pelczar. 1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI-Press. Jakarta

Sadiqul iman. 2010. Isolasi Dan Pemurnian Mikroba.  www.Sadiqul Iman.4shared.com.  Diakses pada tanggal 15 Januari 2012. Campalagian 

Trianda. 2011. Inokulasi Mikroba Mkrobiologi.  www.Trianda.herisonsurbakti.com.   Diakses pada tanggal 15 Januari 2012. Campalagian 

Uji Sanitasi Lingkungan

BAB I

PENDAHULUAN

I.1 Latar Belakang

Sebenarnya tidak benar-benar ada organisme yang hidup di udara, karena organisme tidak dapat hidup dan terapung begitu saja di udara. Flora mikroorganisme udara terdiri atas organisme yang terdapat sementara mengapung di udara atau terbawa serta pada partikel debu. Jumlah dan tipe mikroorganisme yang mencemari udara ditentukan oleh sumber pencemaran didalam lingkungan: misalnya dari saluran pernapasan manusia disemprotkan melalui batuk dan bersin, dan parikel-partikel debu dari permukaan bumi diedarkan oleh aliran udara. Kontaminasi oleh mikroorganisme dapat teradi setiap saat, oleh sebab itu karena sanitasi lingkungan sangat perlu untuk diperhatikan terutama yang akan bekerja dalam bidang mikrobiologi atau pengolahan produk makanan atau industri (Mustahib, 2011)

Mikroba-mikroba yang mengkontaminasi inilah yang menjadi penyebab dalam pembusukkan sampah, makanan dan minuman. Miroorganisme ini juga dapat menimbulkan penyakit yang membahayakan manusia. Untuk itulah, higienitas sanitasi lingkungan dan keamanan makanan menjadi sangat penting agar tidak menimbulkan gangguan kesehatan. Melihat pentingnya hal tersebut maka kami berenisiatif melakukan praktikum uji kontaminasi mikroba atau sanitasi lingkungan

I.2 Tujuan Percobaan

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah :

1.      untuk mengetahui terjadinya kontaminasi pada udara

2.      untuk mengetahui terjadinya kontaminasi pada tangan

3.      untuk mengetahui terjadinya kontaminasi pada alat

I.3 Waktu Dan Tempat Percobaan

Praktikum dilaksanakan pada hari kamis tanggal 5 januari 2012, pukul 16.30-17.15,  di laboratorium biologi dasar FMIPA Universitas Hasanuddin Makassar.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Sanitasi adalah perilaku disengaja dalam pembudayaan hidup bersih dengan maksud mencegah manusia bersentuhan langsung dengan kotoran dan bahan buangan berbahay lainnya dengan harapan  usaha ini akan meningkatkan kesehatan manusia. Usaha ini akan menjaga dan meningkatkan kesehatan manusia. Bahaya ini mungkin bisa terjadi secara fisik, mikrobiologi dan agen-agen kimia atau biologis dari penyakit terkait.Bahan buangan yang dapat menyebabkan masalah kesehatan terdiri dari tinja manusiaatau binatang, sisa bahan buangan padat, air bahan buangan domestik ( cucian, air seni, bahan buangan mandi atau cucian), bahan buangan industry dan bahan bungan pertanian.  Cara pencegahan bersih dapat dilakukan dengan menggunakan solusi teknis (contohnya perawatan cucian dan sisa cairan buangan). Defenisi lain dari sanitasi adalah segala upayah yang dilakukan untuk menjamin terwujudnya kondisi yang memenuhi persyaratan kesehatan. Sementara beberapa defnisi lainnya menitik beratkan pada pemutusan mata rantai kuman dari sumber penularannya (Wikipedia, 2011).

Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari mikroba. Mikrobiologi adalah salah satu cabang ilmu dari biologi, dan memerlukan ilmu pendukung kimia, fisika, dan biokimia. Mikrobiologi sering disebut ilmu praktek dari biokimia. Dalam mikrobiologi dasar diberikan pengertian dasar tentang sejarah penemuan mikroba, macam-macam mikroba di alam, struktur sel mikroba dan fungsinya, metabolisme mikroba secara umum, pertumbuhan mikroba dan faktor lingkungan, mikrobiologi terapan di bidang lingkungan dan pertanian. Mikrobiologi lanjut telah berkembang menjadi bermacam-macam ilmu yaitu virologi, bakteriologi, mikologi, mikrobiologi pangan, mikrobiologi tanah, mikrobiologi industri, dan sebagainya yang mempelajari mikroba spesifik secara lebih rinci atau menurut kemanfaatannya (Sumarsih, 2003).

Mikroba di alam secara umum berperanan sebagai produsen, konsumen, maupun redusen. Jasad produsen menghasilkan bahan organik dari bahan anorganik dengan energi sinar matahari. Mikroba yang berperanan sebagai produsen adalah algae dan bakteri fotosintetik. Jasad konsumen menggunakan bahan organik yang dihasilkan oleh produsen. Contoh mikroba konsumen adalah protozoa. Jasad redusen menguraikan bahan organik dan sisa-sisa jasad hidup yang mati menjadi unsur-unsur kimia (mineralisasi bahan organik), sehingga di alam terjadi siklus unsur-unsur kimia. Contoh mikroba redusen adalah bakteri dan jamur (fungi) (Sumarsih, 2003).

Udara mengandung campuran gas-gas yang sebagian besar terdiri dari Nitrogen (N2) 23%, Oksigen (O2) 21% dan gas lainnya 1%. Selain gas juga terdapat debu, kapang, bakteri, khamir virus dan lain-lain. Walaupum udara bukan medium yang baik untuk mikroba tetapi mikroba selalu terdapat di udara. Adanya mikroba disebabkan karena pengotoran udara oleh manusia, hewan, zat-zat organik dan debu. Jenis-jenis mikroba yang terdapat di udara terutama jenis Bacillus subtilis dapat membentuk spora yang tahan dalam keadaan kering (Pelczar, 1988).

Mikroorganisme asal udara dapat terbawa partikel debu, dalam tetes-tetes cairan berukuran besar dan tersuspensikan hanya sebentar, dan dalam inti tetesan yang terbentuk bila titik-titik cairan berukuran kecil menguap. Organisme yang memasuki udara dapat terangkut sejauh beberapa meter atau beberapa kilometer. Sebagian segera mati dalam beberapa detik, sedangkan yang lain dapat bertahanhidup selama berminggu-minggu, berbulan-bulan, atau lebih lama lagi. Nasib akhir mikroorganisme asal udara diatur oleh seperangkat rumit keadaan disekelilingnya, termasuk keadaan atmosfer, kelembapan, cahaya matahari dan suhu, ukuran partikel yang membawa mikroorganisme (Pelczar, 1988).

Udara sebenarnya bukan merupakan habitat untuk mikroorganisme. Sel- sel mikroorganisme dalam udara bersama kontaminan bersama debu atau dengan tetesan ludah. Mikroorganisme yang banyak terdapat di udara adalah bakteri, dan jamur atau khamir. Mikroba tersebut ada di udara dalam bentuk vegetatif ataudalam bentuk generatif. Mikroorganisme yang berada di atmosfer merupakan spesies yang ada dari sumber dimana mikroorganisme tersebut sebelumnya. Mikroorganisme    yang berasal dari tanah terbawa debu angin, demikian juga dengan mikroorganisme yang berasal dari perairan, mikroba terbawa tetesan air atau angin ke udara. Bakteri yang mampu hidup di lingkungan udara umumnya bakteri gram positif berbentuk batang berspora dan kokus, sedangkan bakteri dar lingkungan laut yang mampu berada di udara adalah gram negative berbentuk batang, sebagian adalah membentuk spora (Tya, 2010).

Proses sanitasi terhadap mikroorganisme perlu diperhatikan karena banyak mikroorganisme penyebab penyakit yang bisa menginfeksi manusia melalui udara, alat, ataupun dari tangan dan bahkan pada bahan pangan (Wikipedia, 2011).

Udara dalam suatu ruangan dapat merupakan sumber kontaminasi mikroba. Udara tidak mengandung mikroflora secara alami, tetapi kontaminasi dari lingkungan sekitarnya mengakibatkan udara mengandung berbagai mikroorganisme, misalnya dari debu, air, proses aerasi, dari penderita yang mengalami infeksi saluran pencernaan, dari ruang yang digunakan dalam fermentasi dan seabagainya. Mikroba yang terdapat di udara biasanya melekat pada bahan padat, misalnya debu, atau terdapat dalam droplet air (Weslie, 2008).

Mikroba yang sering terdapat pada kulit, misalnya bakteri pembentuk spora dan stapilokoki, sedangkan pada rambut sering terdapat kapang. Suatu penelitiaan menunjukkan bahwa masusia dapat mengeluarkan 10 sampai  organisme hidup setiap menit, dimana jumlah dan jenisnya tergantung lingkungan disekitarnya (Weslie, 2008).

Sanitasi yang dilakukan terhadap wadah dan alat meliputi pencucian untuk menghilangkan kotoran dan sisa-sisa bahan, diikuti dengan perlakuan sanitasi dengan menggunakan germisidal. Dalam pencucian menggunakan air, biasanya menggunakan deterjen untuk membantu proses pembersihan. Penggunaan deterjen mempunyai beberapa keuntungan karena deteren dapat melunakkan air, mengemulsikan lemak, melarutkan mineral dan komponen larut lainnya sebanyak mungkin. Deterjen yang digunakan untuk memcuci wadah dan alat pengolahan tidak boleh korosif dan mudah dicuci dari permukaan (Weslie, 2008)

Proses sanitasi wadah dan alat ditujukan untuk membunuh sebagian besar atau semua microorganisme yang terdapat pada bagian permukaan. Sanitizer yang sering digunakan misalnya air panas, uap panas, halogen (khlorin atau iodine) turunan halogen dan komponen ammonium quaternair (Weslie, 2008)

Faktor-faktor yang menguasai kehidupan bakteri antara lain sebagai berikut :

o Suhu

Suhu merupakan salah satu faktor penting dalam kehidupan mikroba. Beberapa mikroba dapat tumbuh pada kisaran suhu yang luas. Berkait dengan pertumbuhan dikenal suhu minimum, maksimum, dan optimum. Suhu minimum adalah suhu yang paling rendah dimana kegiatan masih berlangsung. Suhu optimum adalah suhu yang paling baik untuk kehidupan jasad. Sedangkan suhu maksimum adalah suhu tertinggi yang masih dapat menumbuhkan mikroba tetapi pada tingkat kegiatan fisiologi yang paling rendah (Hidayat, 2006).

o Bahan Bentuk Gas

Jenis dan konsentrasi gas dalam lingkungan sangat mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme, selain dari jenis-jenis gas yang telah dibicarakan pada bab terlebih dahulu, seperti oksigen dan karbondioksida yang sangat penting untuk kehidupan bakteri. Nitrogen dan amonia adalah esensial untuk siklus nitrogen, dan H₂S mengambil peranan utama dalam siklus sulfur. Tetapi selain gas yang diperlukan untuk pertumbuhan, ada pula gas-gas toksik yang digunakan sebagai bahan untuk mematikan mikroba, seperti formalin dan etilenoksida yang sering dipakai untuk bahan disinfeksi (Irianto, 2006).

o Tekanan Osmosis

Terjadinya plasmolisis dan plasmoptisis disebabkan karena sel berada dalam lingkungan dengan tekanan osmosis lebih tinggi atau lebih rendah dari isi sel. Karena itu, untuk mempertahankan kehidupan sel harus diciptakan tekanan osmosis yang seimbang antara lingkungan dan isi sel (Irianto, 2006).

o Kelembaban dan Pengeringan

Tiap jenis mikroba mempunyai kelembaban optimum tertentu. Pada umumnya khamir dan bakteri membutuhkan kelembapan yang lebih tinggi dibandingkan jamur. Tidak semua air dalam medium dapat digunakan mikroba. Air yang dapat digunakan disebut air bebas. Banyak mikroba yang tahan hidup dalam keadaan kering untuk waktu yang lama. Misalnya mikroba yang membentuk spora, spora, dan bentuk-bentuk kista. Pada proses pengeringan air akan menguap sehingga kegiatan metabolisme terhenti (Hidayat, 2006).

BAB III

METODE PERCOBAAN

III.1 Alat

Alat yang digunakan pada praktikum ini adalah : Cawan petri, Engkas , Lampu spirtus, Gelas ukur dan Inkubator.

III.2 Bahan

Bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah : Medium NA, Alkohol, Medium EMBA , Aquades, Swab, Tangan dalam keadaan bersih dan tidak.

III.3 Cara Kerja

-          Kontaminasi udara

1.      Tangan dibersihkan menggunakan alkohol 70% kemudiaan tangan dimasukkan kedalam engkas

2.      Cawan petri yang berisi medium NA diambil lalu dilidah apikan

3.      Medium tersebut dikeluarkan dari engkas dan diletakkan diatas meja dalam keadaan terbuka selama 30 menit

4.      Setelah 30 menit dibiarkan terbuka kemudian diingkubasi dalam inkubator

-          Uji kebersihan tangan

1.      Tangan terlebih dahulu dibersihkan dengan menggunakan alkohol 70%

2.       Cawan petri pertama yang berisi medium EMBA diambil lalu dilidah apikan

3.      Tangan yang dalam keadaan belum dibersihkan kemudian dioleskan diatas permukan medium EMBA

4.      Tangan yang dalam keadaan bersih kemudian dioleskan juga pada cawan petri kedua yang berisi medium EMBA  yang sebelumnya telah dilidah apikan

5.      Setelah itu cawan petri ditutup kemudian dilidah apikan kembali

6.      Setiap sampel diberi label lalu diinkubasi dalam inkubator

-          Uji kebersihan alat

1.      Tangan dibersihkan dengan menggunakan alkohol 70% kemudian dimasukkan dalam engkas

2.      Cawan petri yang berisi medium NA dilidah apikan

3.      Swab yang telah direndam dalam aquades diambil lalu diperas dengan cara menekankan pada dinding gelas ukur

4.      Selanjutnya swab tersebut dioleskan pada kaca enkas

5.      Swab tersebut kemudian diusabkan secara merata diatas permukaan medium lalu ditutup dan dibungkus dalam keadaan terbalik

6.      Diinkubasi dalam inkubator

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

IV.1 Hasil Pengamatan

                                                                               

               Uji Kontaminasi Udara                          Uji Kebersihan Alat

                                            Uji Kebersihan Tangan

IV.2 Pembahasan

Uji Kontaminasi Udara

Media yang digunakan untuk menguji adanya kontaminasi udara adalah media NA. Masing-masing media tersebut dituangkan ke dalam cawan petri dan dibiarkan terbuka selama 30 menit. Setelah itu ditutup dan kemudian diinkubasikan selama 1 hari pada suhu 38°C. Hasil yang diperoleh adalah bahwa untuk media NA  setelah diinkubasi telah tumbuh  koloni mikroba yang berwarna putih kekuning-kuningan. Hal ini dapat terjadi karena tingkat pencemaran udara di dalam ruangan oleh mikroba dipengaruhi oleh faktor-faktor seperti laju ventilasi, padatnya orang, dan sifat serta taraf kegiatan orang-orang yang menempati ruangan tersebut. Mikroorganisme dapat terhembuskan dalam bentuk percikan dari hidung dan mulut misalnya selama bersin, batuk dan bahkan saat bercakap-cakap. Titik-titik air yang terhembuskan dari saluran penapasan mempunyai ukuran yang beragam dari mikrometer sampai milimeter. Titik-titik air yang ukurannya jatuh dalam kisaran mikrometer yang rendah tinggal di udara sampai beberapa lama, tetapi yang berukuran besar segera jatuh ke lantai atau permukaan benda lain. Debu dari permukaan ini kadang-kadang akan berada dalam udara selama berlangsungnya kegiatan dalam ruangan tersebut.

Media NA digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif dalam artian mikroorganisme heterotrof. Media ini merupakan media sederhana yang dibuat dari beef, pepton, karbohidrat dan agar (Yani Andriani, 2011).

Uji Kebersihan Tangan

Kontaminasi oleh mikroorganisme dapat terjadi setiap saat dan menyentuh setiap permukaan seperti tangan atau alat/wadah. Hasil yang diperoleh pada percobaan ini adalah sebagai berikut: bahwa setelah diinkubasi EMBA yang telah digoresi tangan yang bersih dan tidak, sama-sama tidak ditemukan adanya mikroba hal ini membuktikan bahwa tangan yang dipakai bersih dari mikroba dan cara pemberihan benar-benar teleti. Pada tangan bersih tidak tumbuh mikroba hal ini desebabkan karena cara pembersihan tangan benar-benar teliti sedangkan pada tangan yang tidak bersih juga tidak tumbuh mikroba hal ini mungkin disebabkan karena tangan yang digunakan pada saat percobaan memang dalam keadaan steril atau bisa saja sebelum melakukan percobaan praktikan yang menguji dengan tangan kotor telah melakukan proses sterilisasi sebelum melakukan praktikum. Tangan sangat rentan terkena bakteri dan kapang karena udara kotor mudah menempel pada tangan dan  tangan banyak digunakan untuk melakukan aktivitas.

 Uji kebersihan alat

Media yang digunakan untuk menguji kebersihan alat adalah nutrient agar (NA). Adapun hasil yang telah didapat adalah bahwa tumbuh koloni mikroba pada permukaan cawan, berbentuk bulat-bulat kecil atau bisa juga dikatakan berbentuk titik-titik. Koloni tersebut berwarna putih kekuningan. Jumlah koloni yang tumbuh tidak dapat dihitung karena jumlahnya terlalu banyak untuk dihitung, sedangkan jenis mikroba yang tumbuh kami tidak ketahui karena tidak ada pengamatan yang dilakukan. Walaupun sudah melakukan prosedur pengerjaan dengan sesuai, tapi alat yang digunakan bisa saja masih terkontaminasi oleh bakteri sehingga menyebabkan pertumbuhan koloni. Sebagaimana kita ketahui, media NA merupakan media pertumbuhan yang baik untuk berbagai macam mikroba. Kontaminasi ini terjadi melalui udara atau karena sentuhan tangan manusia

BAB V

PENUTUP

V.1 Kesimpulan

Adapun kesimpulan dari percobaan ini berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan di atas adalah sebagi berikut:

1 Pada uji kontaminasi udara dengan menggunaan media Nutrien Agar telah terjadi kontaminasi mikroba hal ini dibuktikan dengan adanya mikroorganisme yang tumbuh pada medium

1 Pada media pertumbuhan bakteri Eosin Methylen Blue Agar tidak terjadi kontaminasi mikroorganisme hal ini terbukti degan tidak  adanya mikroba yang tumuh baik pada tangan yang telah dibersihkan maupun yang belum

1 pada uji kebersihan alat dengan menggunakan medium NA juga terjadi kontaminasi mikroorganisme karena pada medium nampak adanya mikroba yang tumbuh.

V.2 Saran

            Sebaiknya dalam mengadakan praktikum asisten memperlihatkan hasil pengamatan praktikum yang telah dilakukan secara detail agar dalam penyusun laporan kami tidak mengalami kesulitan.

DAFTAR PUSTAKA

Dwyana Zaraswati dan Haedar Nur. 2012. Penuntun Praktikum Miokrobiologi. Universitas Hasanuddin. Makassar

Dwyana Zaraswati dan Abdullah asadi. 2011. Mikribiologi Dasar. Universitas Hasanuddin. Makassar

Mustahib. 2011. Mikroba Di Udara. www.Mustahib.blogsome.com.  diakses pada tanggal 14 JAnuari 2012. Campalagian

Pelczar. 1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : UI-Press

Tya. 2010. Uji Sanitasi Lingkungan. www.Tya.blogspot.com. Diakses pada tanggal 14 JAnuari 2012. Campalagian

Weslie .2008. Laporan Praktikum Sanitasi. www.Weslie.wordpress.com.    Diakses pada tanggal 14 JAnuari 2012. Campalagian

Yani. 2010. Laporan Praktikum Sanitasi.  www.Yani.scribd.com. Diakses pada tanggal 14 JAnuari 2012. Campalagian